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转录后修饰组测序
MeRIP-seq
m
6
A
(
N
6
-methyladenosine
,
6-
甲基腺嘌呤)是真核生物
mRNA
内部序列中最常见的一种甲基化修饰,同时受到甲基转移酶
/
去甲基化酶以及一些
RNA
结合蛋白的共同调控,在细胞内是一个动态可逆的过程。高通量测序与抗体免疫沉淀相结合(
MeRIP-Seq
或
m
6
A-Seq
),能够在全转录组范围内检测转录本上的
m
6
A
修饰水平。通过在人、小鼠、酵母和拟南芥等系统内的研究,发现
m
6
A
可能会直接或间接影响
mRNA
的出核转运、翻译和降解等。
MeRIP-Seq
可以比较不同细胞、组织、样本间的
RNA
甲基化修饰模式的差异,可广泛用于干细胞、各种疾病样本的研究。通过对沉淀下来的
RNA
片段进行高通量测序,进而结合生物信息学分析,即可全基因组范围内对
m6A
修饰的状况进行系统研究(如下图) 。
目前的
meRIP-seq
结果显示,
m6A
修饰在人转录组中广泛存在,超过
7000
个
mRNA
和
300
个
lncRNA
都含有这种修饰;这种修饰富集分布在
mRNA
的终止密码子附近和
3’UTR
区域,暗示
m6A
修饰具有重要的调控功能。很多
m6A
修饰位点在人和小鼠中保守存在,且某些
m6A
修饰在不同发育时期,其修饰水平也在不断变化,同样暗示其重要的调控功能。
m6A
已知的最主要功能是调控
mRNA
的稳定性:胞质内经过
m6A
修饰的
mRNA
可以被
YTHDF2
识别,使其富集到
P-body
从而加速
mRNA
的降解。此外,
m6A
修饰还可以改变
RNA
的二级结构、调控
microRNA
的靶标识别来调控
mRNA
的稳定性。在核内,
m6A
修饰可以调控
RNA
的剪接、出核过程,从而调控基因表达。
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