转录后修饰组测序
MeRIP-seq
m6AN6-methyladenosine6-甲基腺嘌呤)是真核生物mRNA内部序列中最常见的一种甲基化修饰,同时受到甲基转移酶/去甲基化酶以及一些RNA结合蛋白的共同调控,在细胞内是一个动态可逆的过程。高通量测序与抗体免疫沉淀相结合(MeRIP-Seqm6A-Seq),能够在全转录组范围内检测转录本上的m6A修饰水平。通过在人、小鼠、酵母和拟南芥等系统内的研究,发现m6A可能会直接或间接影响mRNA的出核转运、翻译和降解等。MeRIP-Seq可以比较不同细胞、组织、样本间的RNA甲基化修饰模式的差异,可广泛用于干细胞、各种疾病样本的研究。通过对沉淀下来的RNA片段进行高通量测序,进而结合生物信息学分析,即可全基因组范围内对m6A修饰的状况进行系统研究(如下图) 。

目前的meRIP-seq结果显示,m6A修饰在人转录组中广泛存在,超过7000mRNA300lncRNA都含有这种修饰;这种修饰富集分布在mRNA的终止密码子附近和3’UTR区域,暗示m6A修饰具有重要的调控功能。很多m6A修饰位点在人和小鼠中保守存在,且某些m6A修饰在不同发育时期,其修饰水平也在不断变化,同样暗示其重要的调控功能。

m6A已知的最主要功能是调控mRNA的稳定性:胞质内经过m6A修饰的mRNA可以被YTHDF2识别,使其富集到P-body从而加速mRNA的降解。此外,m6A修饰还可以改变RNA的二级结构、调控microRNA的靶标识别来调控mRNA的稳定性。在核内,m6A修饰可以调控RNA的剪接、出核过程,从而调控基因表达。

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