一、eccDNA合成技术背景
近年来研究表明,大多数肿瘤组织中存在eccDNA,而这些eccDNA往往携带着肿瘤驱动基因,且它的富集通常会促进癌基因的扩增,从而增加了癌基因的可塑性和不稳定性,因此其对肿瘤细胞的进化可能存在着重要意义,这一发现使eccDNA迅速引起了科学界的重视。2018年,Moller, H. D.等从健康人的肌肉和血液细胞中分离到超过十万种的eccDNA分子,其中绝大部分携带基因或基因片段,长度往往在100 bp~10 kb之间。该研究表明eccDNA可能普遍存在。近几年,在高通量测序技术及相关生信分析软件的开发应用,使我们能在整体层面对eccDNA有了更深入的了解,但对感兴趣的单个eccDNA的功能验证,目前仍需通过合成和在细胞水平过表达eccDNA来实现。
图博基因拥有eccDNA合成的已授权专利技术,能快速高效的合成所需大小的eccDNA,目前可以稳定高效的合成长达2.5 kb的eccDNA,用于下游的细胞功能验证。
二、eccDNA合成实例
图博基因通过LAMA技术合成的长度1kb左右的6种eccDNA。限制性内切酶对线性片段及eccDNA环状产物进行酶切鉴定,显示合成的eccDNA内无线性片段残留,全为环状DNA产物。